Back to work

Ondertussen is de vakantie al twee weken geleden, maar nog niet vergeten :). In de vakantie heb ik net zoals de 'Hollanders' carnaval gevierd. Tussen het werken door aan de literatuurstudie, heb ik vooral tijd gemaakt om mijn hobby (paardrijden) uit te oefenen. Ook met vrienden/familie afspreken is zeker gebeurd!

In mijn vorig blogbericht had ik gezegd dat ik eventueel met mijn nieuwe expressievector aan de slag ging kunnen gaan, maar jammer genoeg wordt deze pas begin april opgestuurd, nog even wachten dus. Ondertussen ben ik voor de vakantie wel al kunnen beginnen met een andere oplossing die ze op school hebben liggen. Eenzelfde vector met insert (het stukje dat erin gekloneerd wordt) kan ik gebruiken als tijdelijke oplossing totdat de nieuwe vector binnenkomt.  De bedoeling is om de insert eruit te halen en mijn inserts erin te ligeren.

Als eerste werd het zuivere plasmide verkregen van de vector door miniprep om daarmee een digest (knippen) uit te voeren met de enzymen NdeI en XhoI. Daarna werd gelelektroforese en gelextractie (het nodige bandje wordt uit de gel gesneden op UV-bak) uitgevoerd. Om mijn inserts op een goeie manier te kunnen inbouwen, werden ook deze geknipt (digestie) met NdeI en XhoI. Deze week maandag ben ik dan eindelijk begonnen aan ligatie (insert in vector brengen) en transformatie (over brengen in E.Coli bacterie op plaat). Dit is jammer genoeg niet goed gelukt, omdat de efficiëntie van de transformatie te laag lag. De rest van de week ben ik vooral bezig geweest met het opnieuw verkrijgen van zuiver plasmide van mijn vector (miniprep). 

In deze stage zijn we (Sarah en ik) al met een aantal apparaten in contact gekomen, zoals de spectrofotometer (nanodrop), PCR, BioSpectrometer (OD-waarde te meten) en GenoPlex (foto maken van gel), maar ook met een nieuw apparaat de TapeStation 2200. Hiervoor werd een nieuwe kit besteld, zodat ik deze met mijn stalen kan testen :). Met dit apparaat verkrijg je de informatie van de nanodrop samen met de GenoPlex.

De bedoeling van mijn project is ook om de klassieke klonering te vergelijken met de Gibson klonering, hiervoor zijn de nieuw ontwikkelde primers al toegekomen, dus kan ik er volgende week al mee aan de slag :). 

Neem ook eens een kijkje bij de foto's als je benieuwd bent hoe de apparatuur eruit ziet.

Tot de volgende !!!